микроскопия, двухфотонная (англ. two-photon microscopy) — метод детектирования флуоресцентных микрообъектов с помощью оптического микроскопа, в котором флуоресценция объекта индуцируется благодаря одновременному поглощению двух фотонов, энергия каждого из которых меньше энергии, необходимой для возбуждения флуоресценции.

Описание

Испускание фотона молекулой (флуоресценция) происходит из высокоэнергетических состояний. Переход в эти состояния происходит при поглощении молекулой фотона, энергия которого соответствует энергетической разнице между основным и возбужденным состояниями молекулы. Однако такой переход возможен и при одновременном поглощении нескольких низкоэнергетических фотонов. Поскольку вероятность этого события пропорциональна квадрату интенсивности света, сфокусированного на образец, одновременное поглощение, а соответственно и испускание (двухфотонная флуоресценция) наблюдается только в фокусной плоскости микроскопической системы.

Высокая локализация возбуждения и применение менее энергичных фотонов, по сравнению с классическими флуоресцентными методами (см. флуоресцентная микроскопия) позволяет проводить исследования образцов на большой фокусной глубине (до 1 мм) с высоким контрастом и предохраняет их от выцветания и разрушения под действием света. Аналогичным по возможностям флуоресцентным методом является конфокальная микроскопия.

Автор

  • Борисенко Григорий Геннадиевич

Источник

  1. Denk W., Strickler J.H., Webb W.W. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy // Science. 1990. V. 248. P. 73–76.

Напишите нам